蝦類十足目虹彩病毒1（DIV1）LAMP-HNB快檢方法的建立

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摘要 ［目的］建立一種操作簡便、快速、可視化的蝦類病原檢測方法，實現(xiàn)基層養(yǎng)殖戶自檢。［方法］針對十足目虹彩病毒1（DIV1），設計環(huán)介導等溫擴增（LAMP）特異性引物，對反應試劑用量、溫度、反應時間等條件進行優(yōu)化，建立LAMP與羥基萘酚藍（HNB）結合的LAMP-HNB可視化快速檢測方法。［結果］在LAMP反應體系中添加12 mmol/L Mg2+和250 μmol/L HNB，65 ℃恒溫條件下反應60 min最佳；DIV1病原質粒最低檢出限為102 copies/μL，穩(wěn)定性和特異性較好，通過帶有靶標基因的陽性質粒進行16次重復性試驗結果均較為穩(wěn)定，多種模板擴增試驗均未發(fā)生假陽性情況，符合試驗要求。（剩余7883字）