大西洋鮭傳染性胰腺壞死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重組腺病毒載體的構(gòu)建及其表達(dá)

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摘 要：

傳染性胰腺壞死?。╥nfectious pancreatic necrosis，IPN）是由傳染性胰腺壞死病病毒（infectious pancreatic necrosis virus，IPNV）引起的一種主要危害鮭科魚類的傳染病。為克隆傳染性胰腺壞死病病毒（IPNV）VP2基因和VP3基因，并構(gòu)建其重組腺病毒載體，利用PCR方法分別擴(kuò)增出IPNV VP2基因和VP3基因，通過多基因片段同源重組技術(shù)將IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV載體，經(jīng)過線性化后與pAd-easy-1載體在BJ5183菌體內(nèi)進(jìn)行同源重組，構(gòu)建出重組腺病毒質(zhì)粒；通過PCR及Not Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切鑒定，再經(jīng)Pac Ⅰ線性化后用于轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得重組腺病毒；通過綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的表達(dá)監(jiān)控重組腺病毒的復(fù)制情況，用Western-blotting法分別檢測IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表達(dá)，并測定重組病毒滴度。（剩余16493字）