CA-NHEJ系統(tǒng)對大腸桿菌鏈霉素耐藥基因rpsL的編輯效率及其耐藥性研究

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摘要：以控制質(zhì)?？截悢?shù)的pcnB基因與鏈霉素耐藥性rpsL基因為靶標(biāo)基因，研究CA-NHEJ系統(tǒng)對大腸桿菌的基因編輯效率，及rpsL相關(guān)基因與鏈霉素耐藥性的關(guān)系。通過CA-NHEJ系統(tǒng)成功實現(xiàn)了對大腸桿菌MG1655的pcnB和rpsL基因編輯，其中，pcnB基因編輯效率達(dá)100%，rpsL基因僅有1個克隆缺失第22～24位3個氨基酸，其他4個克隆未編輯成功但具有鏈霉素抗性；進(jìn)一步利用CA-HR系統(tǒng)敲除大腸桿菌MG1655的rpsL基因CCTGCGCTG序列（第22～24位氨基酸），編輯效率達(dá)100%，驗證了CA-HR的高效性，抗性鑒定表明，該序列是影響鏈霉素抗性的關(guān)鍵序列，是一個未曾報道的新突變；對于未編輯成功但具有鏈霉素抗性的4個克隆進(jìn)行基因測序及比對，找出了rhsC和gadB等6個可能與鏈霉素抗性相關(guān)的其他基因。（剩余6257字）