西伯利亞鱘MHC Ⅱ β 克隆、原核表達和多克隆抗體制備

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摘要： 旨在構(gòu)建西伯利亞鱘（ Acipenser baerii）MHC Ⅱ β 基因原核表達載體高效表達，并進行多克隆抗體的制備。根據(jù)GenBank西伯利亞鱘 MHC Ⅱ β 基因序列設(shè)計引物，并加上6-His標簽和酶切位點，從西伯利亞鱘脾臟細胞中克隆可讀編碼框（不含信號肽）部分，克隆并測序鑒定后構(gòu)建Pet30α-MHCⅡβ質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3），異丙基硫代半乳糖苷 IPTG誘導表達，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、免疫印跡（Western Blot）鑒定，誘導表達的融合蛋白大小約為32 ku，能夠與His抗體結(jié)合，融合蛋白主要以包涵體形式存在，在溫度37 ℃時  1 mmol/L  的IPTG誘導4 h可以達到最佳表達量。（剩余9796字）