豬CYP3A29基因核心啟動(dòng)子鑒定及轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析

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摘 要： 旨在鑒定豬CYP3A29基因核心啟動(dòng)子及相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，分析轉(zhuǎn)錄因子對CYP3A29啟動(dòng)子活性的調(diào)控。本研究以3頭健康的大白母豬（30 kg）為試驗(yàn)材料，利用PCR和Western blot檢測CYP3A29基因在豬各組織（心、肝、脾、肺、腎、小腸、肌肉）中的表達(dá)分布；構(gòu)建不同片段長度的CYP3A29基因啟動(dòng)子雙熒光素酶報(bào)告載體，轉(zhuǎn)染293T和AML12細(xì)胞系，檢測熒光素酶活性，確定CYP3A29基因的核心啟動(dòng)子區(qū)域；利用Animal TFDB網(wǎng)站分析CYP3A29核心啟動(dòng)子區(qū)域可能存在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，針對核心啟動(dòng)子區(qū)域構(gòu)建分段缺失雙熒光素酶報(bào)告載體，檢測熒光素酶活性大小，確定轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)；構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合突變位點(diǎn)的雙熒光素酶報(bào)告載體和轉(zhuǎn)錄因子shRNA載體，探討轉(zhuǎn)錄因子對CYP3A29核心啟動(dòng)子的調(diào)控作用。（剩余18620字）