口蹄疫病毒Asia1型豬源中和抗體的篩選與抗原表位鑒定

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摘 要： Asia1型口蹄疫病毒（FMDV）仍然在我國(guó)周邊國(guó)家存在，對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)造成長(zhǎng)期威脅。本研究旨在利用單個(gè)B細(xì)胞抗體技術(shù)研制Asia1型FMDV的中和性單克隆抗體，以此為工具，鑒定Asia1型FMDV的保護(hù)性抗原位點(diǎn)。以FMDV Asia1/JS/05為誘餌抗原，通過流式細(xì)胞術(shù)分選免疫豬PBMCs中的抗原特異性B細(xì)胞，通過巢式PCR擴(kuò)增單個(gè)B細(xì)胞IgG抗體重鏈與輕鏈可變區(qū)基因序列，分別構(gòu)建IgG抗體重鏈與輕鏈表達(dá)質(zhì)粒，將其共轉(zhuǎn)染CHO-S細(xì)胞進(jìn)行抗體表達(dá)；通過間接ELISA、間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、病毒中和試驗(yàn)（VNT）驗(yàn)證抗體反應(yīng)性和中和活性，利用免疫印跡、中和抗體逃逸突變株篩選鑒定中和抗體所識(shí)別的抗原表位類型和抗原表位關(guān)鍵氨基酸。（剩余18047字）