雞球蟲病7價多表位嵌合重組抗原ET seven真核質(zhì)粒的構(gòu)建、表達及其初步功能分析

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摘 要： 為構(gòu)建以雞柔嫩艾美耳球蟲EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相關(guān)蛋白分子為抗原基礎(chǔ)的多表位嵌合重組抗原ET seven真核表達質(zhì)粒，同時驗證其在DF-1細胞中的表達和通過不同輔助遞送方式在雞體內(nèi)的表達及其免疫功能。本研究利用生信分析獲得7個抗原表位，分別提取柔嫩艾美耳球蟲不同發(fā)育階段蟲體總RNA，通過RT-PCR擴增獲得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7個抗原的表位區(qū)域編碼基因，構(gòu)建基因圖譜由公司合成以pcDNA3.1（+）為真核表達載體，構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-ET seven；將鑒定陽性、測序正確的質(zhì)粒pcDNA3.1-ET seven轉(zhuǎn)染至DF-1細胞，利用RT-PCR和Western blot方法檢測ET seven重組基因片段在DF-1細胞中的表達；以磷酸鈣納米顆粒作為輔助質(zhì)粒遞送佐劑檢測pcDNA3.1-ET seven在雞體內(nèi)引起的細胞因子水平變化，間接ELISA檢測特異性IgG抗體水平。（剩余23432字）