SGK3 在小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂恢復(fù)中的作用及其機制

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［摘 要］ 目的：探討血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的蛋白激酶3（SGK3） 在小鼠卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂恢復(fù)中的作用，初步闡明SGK3在哺乳動物卵母細(xì)胞早期發(fā)育中的調(diào)控機制。方法：利用超排卵技術(shù)獲取生發(fā)泡（GV） 期小鼠卵母細(xì)胞，利用顯微注射技術(shù)將表達質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)錄獲得的SGK3 mRNA注射至 GV 期卵母細(xì)胞， 分為對照組、Tris-EDTA 緩沖液（TE） 組和 SGK3 mRNA 組， 采用Western blotting 法檢測各組小鼠卵母細(xì)胞中SGK3 蛋白表達水平， 顯微注射SGK3 mRNA 后1、2、3 和4 h 觀察并計算各組卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂（GVBD） 率，采用SGK3 抗體稀釋抑制實驗觀察各組卵母細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)，采用Western blotting 法檢測體外培養(yǎng)不同時間點卵母細(xì)胞中磷酸化SGK3 （pSer48）（SGK3-pSer48） 和磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白2 （CDC2）（pTyr15）（CDC2-pTyr15） 蛋白表達水平。（剩余14619字）