微小RNA-199a-3p對小鼠皮膚瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制

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摘要：目的 探討微小RNA-199a-3p（miR-199a-3p）對小鼠皮膚瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的調(diào)控作用及其作用靶基因。方法 構(gòu)建小鼠皮膚瘢痕疙瘩模型，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測miR-199a-3p、瘢痕疙瘩相關(guān)基因和Smad1的mRNA表達(dá)。原代分離和體外培養(yǎng)成體C57BL/6小鼠皮膚成纖維細(xì)胞；利用脂質(zhì)體將miR-199a-3p模擬物和Smad1 siRNA轉(zhuǎn)染至小鼠皮膚成纖維細(xì)胞中；雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-199a-3p的靶基因；Cell Counting Kit-8（CCK8）方法驗(yàn)證miR-199a-3p和沉默Smad1對皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響；RT-qPCR和Western blot法分別檢測過表達(dá)miR-199a-3p皮膚成纖維細(xì)胞的瘢痕疙瘩相關(guān)基因和Smad1的mRNA和蛋白表達(dá)；Western blot檢測小鼠皮膚成纖維細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染Smad1 siRNA和miR-199a-3p模擬物后瘢痕疙瘩相關(guān)基因、Smad1的蛋白表達(dá)。（剩余14337字）