LncRNA SNHG11通過(guò)上調(diào)LIN28A表達(dá)促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞干性
[摘要] 目的: 探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因11(small nucleolar RNA host gene 11,SNHG11)對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和干性的影響及其可能的機(jī)制。方法: 通過(guò)TCGA和GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)分析SNHG11在泛癌和對(duì)應(yīng)癌旁組織、胰腺癌和胰腺組織中的表達(dá);通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)SNHG11在胰腺癌PANC1、PaTu8988、MIApaca-2細(xì)胞中的表達(dá);在胰腺癌PANC1和PaTu8988細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1、pcDNA3.1-SNHG11質(zhì)粒,在胰腺癌PANC1和MIApaca-2細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染sh-EGFP、sh-SNHG11質(zhì)粒,qRT-PCR檢測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率,CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖率,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆數(shù)及大小,qRT-PCR及蛋白免疫印跡法分別檢測(cè)干性指標(biāo)NANOG同源框蛋白(NANOG homeobox protein,NANOG)、Y染色體性別決定區(qū)相關(guān)HMG盒基因2(sex determining region of Y-chromosome related HMG-box2,SOX2)、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(octamer binding transcription factor 4,OCT4)、細(xì)胞癌基因myc(cellular oncogene myc,c-myc)和LIN28同源物A(LIN28 homolog A,LIN28A)mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)水平,干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)檢測(cè)干細(xì)胞成球數(shù)量及直徑變化;RNA免疫沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SNHG11和LIN28A結(jié)合情況。(剩余19958字)
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