體外對(duì)牛冠狀病毒復(fù)制具有抑制效應(yīng)藏藥的篩選

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摘 要：

本研究旨在篩選出對(duì)牛冠狀病毒（BCoV）體外復(fù)制具有抑制效應(yīng)的藏藥。構(gòu)建BCoV核衣殼（N）蛋白原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)表達(dá)后將純化的蛋白分別免疫小鼠和兔，獲得鼠抗和兔抗N蛋白多克隆抗體，建立用于測(cè)定BCoV復(fù)制的Western blot和間接免疫熒光法（IFA）；水煎法獲得21種候選藏藥的水提物，CCK-8法測(cè)定水提物對(duì)人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞（HCT-8）的最大安全濃度，以BCoV感染HCT-8細(xì)胞為研究對(duì)象，分別設(shè)置BCoV感染組、藏藥水提物處理組、利巴韋林處理組，在BCoV感染24 h后分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot、IFA測(cè)定細(xì)胞中BCoV復(fù)制量，統(tǒng)計(jì)分析藏藥水提物對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用，篩選對(duì)BCoV具有顯著抑制作用的藏藥。（剩余18691字）