質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)在馬口魚精原干細(xì)胞系基因編輯中的應(yīng)用

打開文本圖片集

摘要：【目的】檢測質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)在馬口魚精原干細(xì)胞（ObSSCs）和斑馬魚胚胎中的基因編輯效果，為開展基因編輯的SSCs移植提供技術(shù)支撐，進(jìn)而推動養(yǎng)殖魚類基因編輯育種工作的快速發(fā)展?！痉椒ā繉邢蚣t色熒光蛋白（RFP）的gRNA整合至可用于體內(nèi)外基因編輯的整合質(zhì)粒pCas9-zU6sgRNA（帶有支架序列的向?qū)NA，由來自斑馬魚的U6啟動子驅(qū)動）和報告質(zhì)粒pCVpf-gRNA（向?qū)NA）中，然后分別轉(zhuǎn)染ObSSCs和顯微注射斑馬魚胚胎，通過熒光顯微鏡觀察和PCR檢測質(zhì)粒CRISPR/Cas9系統(tǒng)在ObSSCs及斑馬魚胚胎中的基因編輯效果。（剩余25576字）