脂肪干細(xì)胞外泌體傳遞miR-145調(diào)控增生性瘢痕成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究

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[摘要]目的：探究脂肪干細(xì)胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）來(lái)源的外泌體（Exosome，Exo）傳遞miR-145對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞（hypertrophic scar fibroblasts，HSF）生物學(xué)功能的影響。方法：從增生性瘢痕組織中分離培養(yǎng)HSF細(xì)胞，從脂肪組織中分離培養(yǎng)ADSCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面標(biāo)記物表達(dá)情況；采用含miR-145過(guò)表達(dá)慢病毒及陰性對(duì)照miR-NC慢病毒感染ADSCs，實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定轉(zhuǎn)染效果，并提取各轉(zhuǎn)染組ADSCs上清液中Exo，獲得含miR-145過(guò)表達(dá)的ADSCs來(lái)源Exo，利用透射電鏡觀察其形態(tài)、納米顆粒跟蹤分析儀檢測(cè)粒徑分布以及Western blot檢測(cè)表面標(biāo)志性蛋白CD63、CD81、CD9和TSG101的表達(dá)情況對(duì)提取的外泌體進(jìn)行鑒定；添加外泌體培養(yǎng)HSF細(xì)胞，具體分組包括對(duì)照組、Exo組、miR-NC-Exo組、miR-145-Exo組，PKH26熒光標(biāo)記的ADSC來(lái)源的Exos與HSF細(xì)胞培養(yǎng)，共聚焦熒光顯微鏡觀察外泌體能否被細(xì)胞攝取，EdU檢測(cè)各組HSF細(xì)胞的增殖能力，Annexin Ⅴ-FITC/PI法檢測(cè)各組HSF細(xì)胞的凋亡水平，Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白（cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2）及Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原（COL-Ⅰ、COL-Ⅲ）的蛋白表達(dá)水平。（剩余15272字）