煙草花葉病毒實時熒光定量PCR檢測體系的構(gòu)建

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摘要 ［目的］防止隱癥攜帶煙草花葉病毒（TMV）的煙苗移栽到大田造成產(chǎn)量損失。［方法］根據(jù)TMV的外殼蛋白（coat protein，CP）基因保守序列設計引物及探針，通過繪制標準曲線、重復性、特異性及靈敏性分析，建立了一種TMV的TaqMan-qPCR檢測方法。［結(jié)果］該方法特異性好，與其他常見的煙草病毒無交叉反應；靈敏度高，檢測下限可達到4.53×101 copies/μL，比常規(guī)RT-PCR檢測靈敏度提高了10倍；建立的標準曲線斜率為-3.299，決定系數(shù)（R2）為0.993 3，擴增效率為100.97%，且循環(huán)閾值（Ct）與質(zhì)粒標準品濃度之間線性關系良好，重復性試驗結(jié)果可靠。（剩余10666字）